Clinical Cancer Research封面文章 I Luminal B型乳腺癌患者新辅助治疗后获得病理缓解
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Clinical Cancer Research封面文章 I Luminal B型乳腺癌患者新辅助治疗后获得病理缓解
70%的浸润性乳腺癌都是HR+，HER2-，一般采用分子或病理的方法对乳腺癌进行分型。临床上经常基于免疫组化（IHC）将乳腺癌分为Luminal A型和Luminal B型，但这种分型不能覆盖全部的患者，所以现在基于分子特征的分型越来越常被应用。
新辅助治疗是对潜在可接受手术切除的患者，先给予术前抗肿瘤治疗后再进行手术治疗。新辅助治疗通过术前治疗可以缩小肿瘤体积，降低肿瘤的分期；并且可以杀灭患者机体中循环肿瘤细胞及微转移病灶，令患者远期生存获益。通过新辅助治疗，可以很好得检测新治疗方法的有效性。免疫检查点抑制剂越来越多的被应用于新辅助治疗，HP+，HER2-乳腺癌通常被认为免疫反应最弱，肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）水平低，肿瘤突变负荷低，在这种条件下免疫治疗难以充分发挥作用。LumB型通常具有更高的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）水平和肿瘤突变负荷。
GIADA是一个由意大利四个研究中心的研究者主导的单臂多中心二期临床试验。研究纳入绝境前期的乳腺癌患者，乳腺癌分期位于II期到IIIA期，患者经多方评判适合接受新辅助化疗。入组的患者将接受三个周期的表柔比星和环磷酰胺联合治疗，每个周期21天；随后每天口服纳武利尤单抗治疗，为期14天；同时从化疗起每28天肌肉注射曲普瑞林。在接受纳武利尤单抗治疗的最后2到5周进行手术。FFPE或FF样本在基线期（t0），化疗后7天（t1）和手术时（t2）获取用于后续研究。临床试验的主要重点为病理完全缓解（pCR），次要重点为临床客观反应。
研究者对收集到的样本进行了基因表达检测，同时对样本进行了组化和多重免疫荧光检测。使用HE染色评估基质中的TIL水平；使用IHC检测组织中的AR441表达情况。之后，他们为mIHC设计了两个panel，分别是免疫检查点（checkpoint）panel和淋巴panel。免疫检查点panel包含了CD68，CD163，CD3，PD-1和PD-L1；淋巴panel包含GrB，CD4，CD8，FoxP3和CD20。随后对样本采用Opal试剂进行多重染色并使用PhenoImager平台进行拍摄，inForm软件对拍摄的图片进行分析。研究者将t0期的TIL作为一个简单的判断乳腺癌免疫微环境炎症水平的指标，结合多种分子指标表达水平分析这些指标与患者病理完全缓解(pCR)相关性，发现TIL与pCR具有强相关性。
检查点panel的mIHC图像颜色:CD3为洋红色，PD-1为黄色，CD68为白色，CD163为绿色，PD-L1为红色，泛细胞角蛋白为青色，细胞核为蓝色。淋巴panel mIHC图像的颜色:CD8为洋红色，CD4为黄色，颗粒酶B为绿色，FoxP3为白色，CD20为橙色，泛细胞角蛋白为青色，细胞核为蓝色。
随后研究者通过mIHC详细分析肿瘤样本的免疫浸润情况。发现肿瘤中的淋巴细胞浸润以CD3+T细胞为主，CD4+和CD8+T细胞的比例变化较大；PD-L1几乎仅在CD68+T细胞中表达，而PD-1仅在CD3+T细胞中检测到。在t0期，在pCR患者中，CD3+T细胞和巨噬细胞（CD68+）数量高于非pCR患者；CD3+PD-1淋巴细胞，CD68+PD-L1+和CD68+CD163+PD-L1+巨噬细胞数量也更高。从t0期到t1期，经过化疗后，TIL水平明显升高，在肿瘤区域，CD8+和CD8+GrB+细胞显著增多；在肿瘤和基质区域，CD4+FoxP3+和CD8+CD163+都明显减少，CD8+/CD4+比例也更高，说明肿瘤免疫浸润水平提升。
检查点panel的mIHC图像颜色:CD3为洋红色，PD-1为黄色，CD68为白色，CD163为绿色，PD-L1为红色，泛细胞角蛋白为青色，细胞核为蓝色。淋巴panel mIHC图像的颜色:CD8为洋红色，CD4为黄色，颗粒酶B为绿色，FoxP3为白色，CD20为橙色，泛细胞角蛋白为青色，细胞核为蓝色。
研究发现，TIL与Basal亚型预测pCR具有非常高的灵敏度与特异性。通过mIHC进行的免疫细胞分型（细胞毒性T细胞，调节性T细胞和免疫检查点表达细胞），发现在pCR患者与非pCR患者中的免疫细胞数量呈现明显差异。同时，研究还发现蒽环类化疗对免疫微环境的影响，在接受盐酸表柔比星-环磷酰胺治疗后，TIL水平变高，肿瘤内激活的细胞毒性T细胞数量更多，并且免疫抑制细胞更少。
本文中，通过PhenoImager解决方案对乳腺癌患者的肿瘤免疫微环境进行了深入的研究，发现了免疫微环境在新辅助治疗中的变化情况。PhenoImager可以帮助临床医生和肿瘤研究者检测肿瘤患者的免疫微环境变化，从而深入了解治疗对患者的影响和进行预后预测。
【参考信息】
1. Neoadjuvant Chemotherapy and Immunotherapy in Luminal B-like Breast Cancer: Results of the Phase II GIADA Trial. Clincal Cancer Research. January 2022. Volume 28, Issue 2.
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