案例分享|Opal7色免疫荧光定量分析方案助力心脏移植排异预后判断及精准治疗方案开发

心脏移植排斥反应(cardiac allograft rejection, CAR)是移植受者的一个严重担忧，约有三分之一的患者在移植后第一年发生排斥反应，增加短期和长期移植物衰竭的风险。国际心肺移植学会(ISHLT)建议定期监测CAR的标准组织分级的心内膜心肌活检(EMB) （表1 ）。

本期案例来自于宾夕法尼亚大学艾略特·佩斯特教授(Dr. Eliot Peyster)团队的分享，相关工作一于今年4月发表在《JACC: Basic to Translational Science》。

Dr. Eliot Peyster团队将Phenoptics定量多重免疫荧光(QmIF)方法应用于临床EMB组织样本进行分析，重点揭示了组织中的免疫细胞表型，可以提高CAR的组织学分析的诊断和预后性能，克服了传统的形态学CAR检测方法（苏木-精和伊红染色）可提示的免疫细胞具体类型等信息有限的缺点，可以高对长期的风险分层的判断、为监测测试和免疫治疗等提供精准化信息（图1）。

图一， 传统方案和多色免疫荧光对比

图二，患者分组流程

Dr. Eliot Peyster等使用7色免疫荧荧光方案，同时染色了 CD3+、CD8+、CD68+、FoxP3+ 和PD-L1+等指标（图三）。高评分组中CD3+和CD8+ 细胞数量显著高于低评分组，和传统评估方法一致，但和临床排异反应严重性的相关程度较弱。而CD68+, FoxP3+, and PD-L1+ 和临床排异反应的严重程度呈显著正相关。

图三，对EMB样本进行H&E染色和 7色免疫荧光染色分析

Dr. Eliot Peyster团队的工作支持了多色免疫荧光定量分析方案揭示免疫表型表征异体心脏活检的可行性和临床益处。特别是，调节T细胞（FoxP3+）和PD-L1表达的丰富度与临床移植物状态相关的研究结果表明，排斥反应抑制过程可能导致患者临床轨迹与ISHLT活检分级之间经常观察到的不一致。抑制PD-L1与临床显著的异源免疫相关的发现是最近检查点分子抑制剂可诱发严重心肌炎报道的相关延伸。

Reference

Peyster,et al., In Situ Immune Profiling of Heart Transplant Biopsies Improves Diagnostic Accuracy and Rejection Risk Stratification JACC Basic Transl Sci . 2020 Apr; 5(4): 328–340. Published online 2020 Apr 1. doi: 10.1016/j.jacbts.2020.01.015

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