精选分享|跟斯坦福大咖学习PBMC样本26色免疫细胞成像和深度分型
随着COVID-19相关研究的不断深入，研究人员发现不同感染程度的患者外周血（PBMC）样本中的免疫细胞组成和状态略有差异，是否和患者的预后相关或辅助优化临床治疗方案仍在研究中。相较于其他临床样本，PBMCs更容易获取，也是其他免疫相关研究的重要样本。
使用CODEX对PBMC样本中的免疫细胞进行了26-plex染色和深度分型分析的案例分享获得了广泛关注。因此，Akoya携手斯坦福多色成像平台大咖进行了PBMC深度分析的网络分享会。本期分享截取了部分精彩内容，完整视频可通过点击文末阅读原文获取。
PBMC细胞悬液可按照Akoya推荐protocol进行固定、26种蛋白标志物抗体一次性孵育，自动染色和成像。
在CODEX的成像过程中，DAPI染色定位的细胞位置在经历多个染色成像循环后，细胞数量基本保持不变（图1）。说明按照推荐的protocol对PBMC样本进行处理后，细胞可以基本被保留，不会出现样本丢失的问题。
图一 CODEX染色过程中细胞基本完整保留在盖玻片上
同时PBMCs在盖玻片上的细胞密度进行了测试。对比了低密度和高密度下的样本状态。图x展示了细胞密度约为3’056 cells / mm2 的情况。在这个细胞密度下，每一个细胞仍可以清晰辨认，确保后续进行准确的细胞分割。
图二 PBMC样本DAPI染色，细胞密度约为 3056 cells / mm2
CODEX分析软件MAV具备强大的分析功能，除了支持单细胞水平的图像展示，还支持类似流式设门、分步深入分析，荧光定量、空间距离热图、不同类型细胞细胞密度的可视化展示、T-SNE降维展示等。图三中展示了使用MAV对PBMC样本进行非监督型聚类分析，识别出了11种细胞类型。
图四 MAV细胞分型结果具有一致性
图五 使用MAV分析PBMCs中各种细胞比例和公开参考值
