Xenium 5K Akoya PCF助力高分文章上线！
滤泡性淋巴瘤（FL）是第二常见的非霍奇金淋巴瘤，通常进展缓慢，但部分患者会出现早期复发甚至侵袭性转化，导致预后不良。现行的预后系统如FL国际预后指数（FLIPI）主要依赖临床病理参数，未能充分反映肿瘤微环境（TME）的复杂性，也未被用于指导治疗策略的选择。因此，探索新的生物学标志物以优化风险分层和治疗策略迫在眉睫。
文章题目：Distinct follicular T cell subsets regulate lymphoma progression and outcomes
期刊：Cancer Cell
影响因子：48.8
发表时间：2025年7月
图1 研究思路
研究内容
一、单细胞RNA测序（scRNA-seq）与泛癌分析
研究人员首先对7例无转移淋巴结（MFLN）和6例FL样本的T细胞进行单细胞RNA测序，共鉴定出59,117个T细胞并划分为9个亚群，其中包括非TFH滤泡T细胞亚群（TFR和TFC）以及TFH、Treg、细胞毒性T细胞（Tct）等七个已知亚群。与MFLN相比，FL中TFR、TFC4和TFC8细胞的比例显著升高，且这些细胞表现出独特的多功能基因和蛋白质表达模式。随后，研究人员整合了26种癌症的30个scRNA-seq数据集，发现TFR细胞在FL中比例显著高于其他癌种，而TFC4/TFC8细胞在FL和弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中均富集，但FL中TFC4比例更高。
图2 单细胞RNA测序（scRNA-seq）与泛癌分析结果
二、空间转录组技术（Xenium）与多重数字空间蛋白检测（PCF）
研究人员利用Xenium空间转录组技术（Xenium Prime 5K Human Pan Tissue & Pathway Panel）对12个福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）FL样本进行原位分析，并结合PCF（28-plex 抗体组合）验证242例患者组织。结果显示，TFR细胞密集分布于肿瘤性滤泡（NF）核心区域，与恶性B细胞和TFH细胞形成紧密共定位；而TFC4/TFC8细胞则特异性聚集在NF边缘，与耗竭性T细胞（Tct-exh）共同构成“包围网”结构。通过细胞间配体-受体互作分析，证实CXCL13-CXCR5轴驱动TFR/TFC细胞向NF定向迁移，而CCL19/CCL21-CCR7轴介导TFC细胞向T细胞区迁移，形成空间互补的免疫生态位。
图3 FL中非TFH滤泡T 细胞亚群的Xenium空间分析结果
图4 PCF检测的 FL中非TFH 滤泡T 细胞亚群的生态位形成
三、细胞诱导实验与功能验证
单细胞TCR测序、RNA速度分析和体外细胞诱导实验证实，FL中TFH细胞过度分泌IL-21是驱动非TFH滤泡T细胞亚群分化的核心微环境因素。TFR细胞与TFH/Treg细胞共享TCR克隆型，其分化依赖IL-21与TGF-β1协同作用，高表达IL10和TFH相关基因；TFC4细胞源自TFH，在TGF-β1作用下下调CD40L并上调CCR7/TCF1；TFC8细胞则来自Tct-rst细胞，经IL-21诱导后获得GZMM/TCF1高表达和PRDM1下调的表型。空间分析显示IL-21在TFR/TFC细胞富集区域密度显著升高，且体外添加IL-21/TGF-β1能高效诱导Treg、TFH和Tnv8细胞分别分化为诱导的TRF（i-TFR）、i-TFC4和i-TFC8细胞，由此验证了IL-21主导的微环境信号是塑造FL非TFH滤泡T细胞亚群独特表型的关键机制。
图5 非 TFH 滤泡 T 细胞亚群在 FL 中的功能
四、非TFH滤泡T细胞亚群的抗肿瘤机制
实验结果证实，TFR细胞通过高表达IL-10和PD-1等抑制性分子，显著抑制TFH细胞的活化与增殖，从而阻断其对恶性B细胞的辅助作用；TFC4/TFC8细胞则表现出更强的IFN-γ/TNF-α分泌能力及CD107a介导的脱颗粒活性，直接杀伤B细胞并诱导其凋亡，且TFC8细胞的杀伤效能优于耗竭性CD8 T细胞。此外，TFR细胞对CXCL13的趋化响应与TFC细胞对CCL19/CCL21的迁移能力差异，进一步解释了它们在肿瘤滤泡内外的空间分布特征。这些研究证实，非TFH滤泡T细胞亚群通过间接（TFR抑制TFH）与直接（TFC杀伤B细胞）的双重机制协同抑制FL进展。
图6 FL 中非 TFH 滤泡 T 细胞亚群的生态学
五、PCF（即PhenoCycler Fusion）分析非TFH滤泡T细胞亚群的预后价值
基于PCF数据的多中心回顾性队列分析发现，TFR和TFC细胞比例与24个月内疾病进展显著负相关，且TFR≥2.0%或TFC≥2.5%的患者无进展生存期（TTR）明显延长。进一步整合TFR/TFC双指标构建的“TFR/TFC分类”可独立于FLIPI风险分层预测TTR，并在不同年龄、病理分级和治疗方案的亚组中保持稳健预后价值。ROC曲线分析显示加入TFR/TFC信息后，TTR预测模型的AUC、连续净重新分类指数（NRI）和综合判别改善指数（IDI）均显著改善。总之，对非TFH滤泡T细胞亚群的定量分析在多个独立的FL队列中显示出预后意义，表明这些细胞具有抗肿瘤特性，并有可能改善淋巴瘤的风险分层。
图7 基于 PCF 的多中心预后研究
本研究运用单细胞转录组、Xenium 5K空间转录原位分析以及PCF（即PhenoCycler Fusion）（28-plex抗体组合）空间蛋白等综合性高分辨率多组学技术对FL患者的滤泡T细胞进行了全面解析，揭示了蕴含异质性滤泡T细胞亚群的免疫生态系统，并阐明了其生物学机制与临床意义，为FL的免疫治疗提供了新靶点和理论依据。这一发现不仅深化了对淋巴瘤免疫微环境的理解，也为开发基于T细胞亚群的精准治疗策略奠定了基础。
图8 研究概览
参考文献：
Abe et al., Distinct follicular T cell subsets regulate lymphoma progression and outcomes, Cancer Cell (2025), https://doi.org/10.1016/j.ccell.2025.06.013
图片来源：图片均来源于参考文献
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